[1]胡慧玲,蒋丽琼,佘洁婷,等. WERI-Rb1肿瘤干细胞的分离扩增及鉴定[J].眼科新进展,2015,35(5):428-431.[doi:10.13389/j.cnki.rao.2015.0116]
　HU Hui-Ling,JIANG Li-Qiong,SHE Jie-Ting,et al. Isolation, amplification and identification of cancer stem cells in WERI-Rbl[J].Recent Advances in Ophthalmology,2015,35(5):428-431.[doi:10.13389/j.cnki.rao.2015.0116]
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 WERI-Rb1肿瘤干细胞的分离扩增及鉴定
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《眼科新进展》[ISSN:1003-5141/CN:41-1105/R]

卷:
35卷
期数:
2015年5期
页码:
428-431
栏目:
实验研究
出版日期:
2015-05-05

文章信息/Info

Title:
 Isolation, amplification and identification of cancer stem cells in WERI-Rbl
作者:
 胡慧玲; 蒋丽琼; 佘洁婷; 方敏
 518000　广东省深圳市，暨南大学附属深圳眼科医院，深圳市眼科医院，深圳眼科学重点实验室
Author(s):
 HU Hui-Ling ; JIANG Li-Qiong ; SHE Jie-Ting ;  FANG Min
 Shenzhen Ophthalmic Center, Medical College of Jinan University, Shenzhen Eye Hospital , Shenzhen Key Laboratory of Ophthalmology, Shenzhen 518000 , Guangdong Province , China
关键词:
 ; 视网膜母细胞瘤; 肿瘤干细胞; 细胞培养
Keywords:
 ; retinoblastoma ;  cancer stem cells ;  cell culture
DOI:
10.13389/j.cnki.rao.2015.0116
文献标志码:
A
摘要:
 目的　分离培养人视网膜母细胞瘤细胞系ＷＥＲＩ-Ｒｂ１中的肿瘤干细胞，建立肿瘤干细胞的鉴定方法。方法　将ＷＥＲＩ-Ｒｂ１细胞系接种至无血清培养基，对其中的肿瘤干细胞行分离、培养扩增及传代，观察细胞形态，采用旁群细胞检测、克隆形成实验、ＣＤ１３３流式细胞仪检测、荧光定量ＰＣＲ等方法对肿瘤干细胞特性进行鉴定。结果　体外扩增培养的ＷＥＲＩ-Ｒｂ１细胞系呈疏松葡萄状团块，ＷＥＲＩ-Ｒｂ１细胞系中存在比例稳定的旁群细胞（０．０７５±０．０１７）％，无血清培养基可分离扩增培养出ＷＥＲＩ-Ｒｂ１中的肿瘤干细胞，形成类似胚胎干细胞的克隆团块，后者具备较高的克隆形成能力，克隆形成率为（３１．７０±１．８９）％，且干细胞标记物ＣＤ１３３的基因及蛋白均高表达，ＣＤ１３３基因表达量为ＷＥＲＩ-Ｒｂ１的（２．２５±０．１９）倍。结论　本研究阐明了视网膜母细胞瘤细胞系ＷＥＲＩ-Ｒｂ１肿瘤干细胞的分离、培养、扩增及鉴定方法，证明了ＷＥＲＩ-Ｒｂ１中肿瘤干细胞的存在，为后续对视网膜母细胞瘤的治疗提供线索，为进一步研究视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞及胚胎干细胞等的特性对比提供细胞来源。
Abstract:
 Objective To isolate and culture the cancer stem cells in human retinoblastoma cell line WERI-Rbl , and establish the identification method for cancer stem cells. Methods WERI-Rbl were seeded in serum-free medium for cancer stem cells isolation , expansion and passaging. The cancer stem cell characteristics were determined by Hoechst 33342 stairung , clone formation assay , CD133 flow cytometry and real-time PCR. Results Grape-Iike clusters were shown in WERI-RBI cell line. A small but persistent population of SP cells exhibited in WERI-RBI ( 0. 075% + 0. 017% ) . The stemlike cancer cells displayed highly clonogenic abilities with efficiency of ( 31. 70 + 1. 89)% . The increased CD133 expression was seen in cultured serum-free medium. CD133 gene showed 2. 25 + 0. 19-fold higher expression. Conclusion In our study, the methods for isolation , culture , amplification and identification of cancer stem cells in WERI-Rbl are established. The indication of cancer stem cells existence in WERI-Rbl which might be new target for tumor therapy. This will provide cell source for further study of comparing cancer stem cells and embryonic stem cells.

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更新日期/Last Update: 2015-04-27