《眼科新进展》  2018年2期 164-167   出版日期：2018-02-05   ISSN:1003-5141   CN:41-1105/R

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整合素连接激酶和Toll样受体-2在眼附属器黏膜相关淋巴组织淋巴瘤中的表达及其对预后的影响


    黏膜相关淋巴组织（mucosa-associated lymphatic tissue，MALT）淋巴瘤是临床较为常见的眼附属器淋巴瘤之一，近年来此病发病人数逐渐增加。眼附属器MALT淋巴瘤会对患者的视力及外观等产生不良影响，严重影响患者的生存质量^［1］。眼附属器MALT淋巴瘤发病机制尚不明确，可能与遗传、免疫抑制等多种因素相关^［2-3］。整合素连接激酶（integrin linked kinase，ILK）能够与整合素胞浆域结合，作用于多条与恶性肿瘤相关的信号转导途径^［4］。Toll 样受体-2（Toll like receptors-2，TLR-2）在天然免疫及获得性免疫中具有十分重要的作用，其在免疫细胞及肿瘤细胞中均有表达^［5］。本研究旨在探讨ILK与TLR-2在眼附属器MALT淋巴瘤中的表达及其对患者生存状况的影响。
1　资料与方法
1.1　一般资料　选择2013年1月至 2014年4月我院收治的眼附属器MALT淋巴瘤患者46例（46眼）为研究对象，其中，男24例（24眼），女22例（22眼）；年龄29~73 （57.4±2.5）岁；病灶部位：眼睑20眼，眼眶15眼，泪腺11眼；AnnArbor临床分期，Ⅰ+Ⅱ期37眼，Ⅲ+Ⅳ期9眼。所有患者均实施外科手术切除治疗，术后均辅以化学治疗或放射治疗，收集其瘤组织进行病理研究。纳入标准：（1）经影像学、病理学等检查确诊为眼附属器MALT淋巴瘤；（2）术前未接受任何放射治疗、化学治疗干预处理；（3）病历资料完整。排除标准：（1）存在其他类型的恶性肿瘤者；（2）存在肝、肾等其他器官疾病者。
1.2　免疫组织化学染色　取适量标本组织给予甲醛溶液固定，经石蜡包埋，切片。参照文献［6］的方法进行脱蜡、水化、抗原修复及滴加一抗、二抗、二氨基联苯胺显色操作。ILK 与TLR-2抗体（均购自美国Epitomics公司）浓度均为1∶100。阴性对照采用PBS替代一抗，用已知阳性标本作阳性对照。结果判定：ILK蛋白染色阳性为细胞浆呈棕黄色；TLR-2蛋白染色阳性为细胞膜或细胞浆呈棕黄色。参照免疫组织化学染色评分标准评分：（1）按染色强度计分：无着色为阴性，浅黄色为弱阳性，黄色为中阳性，棕黄色为强阳性，分别计0～3分；（2）按阳性细胞数计分：阳性细胞数≤10% 计为0分，>10%～25%为1分，>25%～50%为2分，＞50%为3分。将（1）、（2）得分相乘：0 分计为（-），1～3 分为（+），4～6 分为（++），7～9 分为（+++）；设（+）～（+++）为阳性，（-）为阴性^［3］。
1.3　术后随访　所有患者均运用信函或者电话等形式进行随访。随访结束时间为2017年4月5日，平均随访36个月。随访内容主要为患者生存期（治疗结束至随访末期的时间）及状态（如死亡、存活、失访等）。
1.4　统计学分析　应用SPSS 21.0统计分析数据，计数资料采用卡方检验，生存期分析采用Kaplan-Meier分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2　结果
2.1　免疫组织化学染色检测结果　ILK 与TLR-2蛋白表达产物均为棕黄色颗粒（图1-图2）。患者瘤组织中的ILK 与TLR-2蛋白表达阳性率分别为67.4%（31/46）、71.7%（33/46），具体见表1。



2.2　ILK、TLR-2蛋白表达与眼附属器MALT淋巴瘤临床特征的关系　患者瘤组织中ILK、TLR-2蛋白表达阳性率均与性别、年龄、病灶部位无关（均为P＞0.05），均与AnnArbor临床分期相关（均为P<0.05；见表2）。





2.3　ILK、TLR-2蛋白与患者术后生存期的关系　46例患者在术后平均3 a随访过程中，2例死亡于MALT淋巴瘤复发（男女各1例，年龄均大于50岁，ILK、TLR-2蛋白表达均为阳性，AnnArbor临床分期均为Ⅳ期，病灶部位眼睑与眼眶各1例，2例均在术后20个月左右死亡），存活44例（存活者无复发），无一例失访。ILK、TLR-2蛋白异常表达与患者术后生存期有关，ILK蛋白表达阳性患者的生存期为（21.5±2.7）个月，低于ILK蛋白表达阴性患者的生存期（29.2±2.1）个月（χ²=6.725，P＜0.05；图3）；TLR-2蛋白表达阳性患者的生存期为（20.4±1.7）个月，低于TLR-2蛋白表达阴性患者的生存期（27.6±2.3）个月（P＜0.05；见图4）。




3　讨论
    MALT 淋巴瘤发病灶常见于胃、肺、眼附属器、皮肤等。眼附属器MALT 淋巴瘤可发病于结膜、泪腺、眼眶等多个眼部位置，起病较为缓慢，症状不是很明显，较难诊断^［7-8］。MRI、B 超、CT等影像学检查是目前诊断眼附属器MALT 淋巴瘤的常见方法，但是此类检查只能明确恶性肿瘤的大小、性质等，如要确诊则还需要行病理学检查。通过病理学检查，运用免疫组织化学染色分析与肿瘤相关的分子标志物在患者病灶组织标本中的表达情况，有益于了解患者临床病理特征，科学预测其预后^［9-10］。
    研究证实^［11-12］，ILK 在胃癌、肝癌及子宫癌等多种癌组织中均存在高表达，且ILK表达程度与肿瘤恶性程度有关。也有学者^［13］通过动物实验发现，ILK 过表达能够诱发裸鼠肿瘤的发生。TLR-2 为TLRs 的重要成员，可通过肿瘤坏死因子受体相关因子-6实施信号转导，诱发核因子κB活化与免疫相关基因进行转录。TLR 信号通路一旦在机体被激活，可以引发促炎细胞因子等的产生^［14］。有学者认为，TLR-2 在肺癌及弥漫性大B细胞淋巴瘤中的异常表达，可能与肿瘤免疫逃避相关^［15-16］。本研究结果显示，眼附属器MALT淋巴瘤患者瘤组织中的ILK 与TLR-2蛋白表达阳性率分别为67.4%、71.7%，这与ILK在胃癌^［17］、TLR-2在口腔癌^［18］中的研究结果一致。表明ILK 与TLR-2的蛋白在眼附属器MALT淋巴瘤中呈高表达，提示ILK 与TLR-2指标异质性较为明显，可用于诊断本病。
    我们还发现，患者瘤组织中ILK、TLR-2的蛋白表达阳性率均与性别、年龄、病灶部位均无关（均为P＞0.05），与AnnArbor临床分期相关（P<0.05）。说明眼附属器MALT淋巴瘤患者ILK、TLR-2的蛋白表达的差异性，会使此类肿瘤细胞生物学行为存在一定的差异。
     术后随访发现，ILK蛋白表达阳性的患者生存期低于ILK蛋白表达阴性患者的生存期（P＜0.05）；TLR-2蛋白表达阳性患者的生存期低于TLR-2蛋白表达阴性患者的生存期（P＜0.05）。提示ILK、TLR-2蛋白表达与眼附属器MALT淋巴瘤预后相关，ILK、TLR-2阴性表达者预后更佳。但是，由于眼附属器MALT淋巴瘤致病机制比较复杂，其可能是多因素共同作用而形成的，故对ILK、TLR-2蛋白表达影响此类患者预后的确切作用机制尚需深入研究。
    综上所述，ILK、TLR-2与眼附属器MALT淋巴瘤的生物学行为密切相关；联合检测ILK、TLR-2对此类疾病诊断及患者预后具有一定的指导价值。