[1]周圆,尹悦,冯俊侨,等.氧化损伤对视网膜色素上皮细胞三联组氨酸核苷结合蛋白1（HINT1）表达的影响[J].眼科新进展,2019,39(1):017-21.[doi:10.13389/j.cnki.rao.2019.0004]
　ZHOU Yuan,YIN Yue,FENG Jun-Qiao,et al.The effect of oxidative stress on the expression of histidine triad nucleotide-binding protein 1 in retinal pigment epithelial cells[J].Recent Advances in Ophthalmology,2019,39(1):017-21.[doi:10.13389/j.cnki.rao.2019.0004]
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氧化损伤对视网膜色素上皮细胞三联组氨酸核苷结合蛋白1（HINT1）表达的影响/HTML
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《眼科新进展》[ISSN:1003-5141/CN:41-1105/R]

卷:
39卷
期数:
2019年1期
页码:
017-21
栏目:
实验研究
出版日期:
2019-01-05

文章信息/Info

Title:
The effect of oxidative stress on the expression of histidine triad nucleotide-binding protein 1 in retinal pigment epithelial cells
作者:
周圆; 尹悦; 冯俊侨; 杨敏; 蔡嘉慧; 吴昌睿; 马乐; 张玮
710061　陕西省西安市，西安交通大学第一附属医院（周圆，吴昌睿，张玮）；710061　陕西省西安市，西安交通大学医学部公共卫生学院（周圆，尹悦，冯俊侨，杨敏，蔡嘉慧，马乐）
Author(s):
ZHOU Yuan; YIN Yue; FENG Jun-Qiao; YANG Min; CAI Jia-Hui; WU Chang-Rui; MA Le; ZHANG Wei
First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University （ZHOU Yuan，WU Chang-Rui，ZHANG Wei），Xi’an 710061，Shaanxi Province，China；School of Public Health，Xi’an Jiaotong University Health Science Center （ZHOU Yuan，YIN Yue，FENG Jun-Qiao，YANG Min，CAI Jia-Hui，MA Le），Xi’an 710061，Shaanxi Province，China
关键词:
过氧化氢; 视网膜色素上皮细胞; 凋亡; 三联组氨酸核苷结合蛋白1
Keywords:
hydrogen peroxide; retinal pigment epithelium; apoptosis; histidine triad nucleotide-binding protein 1
分类号:
R774
DOI:
10.13389/j.cnki.rao.2019.0004
文献标志码:
A
摘要:
目的　探讨过氧化氢（hydrogen peroxide，H2O2）诱导人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）细胞氧化损伤对三联组氨酸核苷结合蛋白1（histidine triad nucleotide binding protein 1，HINT1）表达的影响。方法　将人ARPE-19细胞系分别用0 μmol·L-1 H2O2（对照组）、50 μmol·L-1 H2O2、100 μmol·L-1 H2O2、200 μmol·L-1 H2O2、400 μmol·L-1 H2O2、600 μmol·L-1 H2O2 6个浓度梯度处理。采用Live/Dead荧光双染法和MTT法分别检测细胞活力和增殖能力；采用Western blot检测RPE细胞内BAX、BCL-2以及HINT1的表达水平。结果　H2O2处理6 h后，对照组及50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、400 μmol·L-1及600 μmol·L-1 H2O2组RPE细胞死亡率分别为（0.35±0.11）%、（2.03±0.87）%、（3.76±1.41）%、（12.17±1.26）%、（17.69±2.24）%、（25.22±0.59）%，RPE细胞死亡率呈剂量依赖性升高（P<0.05）。H2O2作用后对照组及50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、400 μmol·L-1、600 μmol·L-1 H2O2组RPE细胞生存率分别为（40.72±2.71）%、（37.75±0.62）%、（35.30±0.68）%、（34.10±0.74）%、（33.61±0.71）%、（31.05±1.41）%，RPE细胞增殖明显减少（P<0.05），具有剂量-效应关系。随着H2O2浓度的增加，BAX蛋白表达逐渐上升（P<0.01），而抗凋亡BCL-2蛋白表达则逐渐下降（P<0.01），BAX/BCL-2比值相比对照组分别升高1.85倍（50 μmol·L-1 H2O2组）、2.35倍（100 μmol·L-1 H2O2组）、2.86倍（200 μmol·L-1 H2O2组）、3.97倍（400 μmol·L-1 H2O2组）、8.50倍（600 μmol·L-1 H2O2组）；HINT1在H2O2处理的RPE细胞中以剂量依赖性方式逐渐下降（P<0.01），分别下降0.78倍（50 μmol·L-1 H2O2组）、0.59倍（100 μmol·L-1 H2O2组）、0.45倍（200 μmol·L-1 H2O2组）、0.42倍（400 μmol·L-1 H2O2组）、0.38倍（600 μmol·L-1 H2O2组）。结论　H2O2氧化损伤诱导RPE细胞活力显著减弱，细胞凋亡相关蛋白BAX表达升高；同时，细胞中HINT1表达下调，表明HINT1可能通过影响细胞凋亡参与年龄相关性黄斑变性的发生，为其药物作用的潜在靶点。
Abstract:
Objective　To investigate the effects of hydrogen peroxide （H2O2） on the expression of histidine triad nucleotide-binding protein 1 （HINT1） in oxidative damaged retinal pigment epithelial （RPE） cells in vitro.Methods　ARPE-19 cell line was cultured conventionally and treated with six different concentrations of H2O2 including 0 μmol·L-1H2O2 （control group），50 μmol·L-1H2O2，100 μmol·L-1H2O2，200 μmol·L-1H2O2，400 μmol·L-1H2O2，600 μmol·L-1H2O2of treatment groups．Live/Dead fluorescent staining and MTT were utilized to evaluate cell viability and proliferative capacity，respectively.The expression of HINT1，BAX and BCL-2 in RPE cell were examined by western blot.Results　The death rates of RPE cells treated with 0 μmol·L-1，50 μmol·L-1，100 μmol·L-1，200 μmol·L-1，400 μmol·L-1 and 600 μmol·L-1 of H2O2 for 6 h were （0.35±0.11）%，（2.03±0.87）%，（3.76±1.41）%，（12.17±1.26）%，（17.69±2.24）%，（25.22±0.59）%，respectively，which significantly increased in a dose-dependent manner （P<0.05）.The proliferation rates of RPE cell treated with 0 μmol·L-1，50 μmol·L-1，100 μmol·L-1，200 μmol·L-1，400 μmol·L-1 and 600 μmol·L-1 of H2O2 were （40.72±2.71）%，（37.75±0.62）%，（35.30±0.68）%，（34.10±0.74）%，（33.61±0.71）%，（31.05±1.41）%，respectively presenting with reduced proliferation ability in a dose-dependent manner （P<0.05）.With the increase of H2O2 concentration，BAX protein level gradually increased （P<0.01），while anti-apoptotic protein BCL-2 gradually decreased （P<0.01）；The relative ratio of BAX/BCL-2 enhanced 1.85-fold（50 μmol·L-1 H2O2），2.35-fold（100 μmol·L-1 H2O2），2.86-fold（200 μmol·L-1 H2O2），3.97-fold（400 μmol·L-1 H2O2），8.50-fold（600 μmol·L-1 H2O2），respectively compared with control group；The level of HINT1 significantly decreased in H2O2 treated RPE cells in a dose dependent manner （P<0.01），with decreased 0.78-fold（50 μmol·L-1 H2O2），0.59-fold（100 μmol·L-1 H2O2），0.45-fold（200 μmol·L-1 H2O2），0.42-fold（400 μmol·L-1 H2O2），0.38-fold（600 μmol·L-1 H2O2），respectively compared with control group.Conclusion　Oxidative injured RPE cells induced by different concentrations of H2O2 show decreased cell viabilities and increased level of apoptosis-related proteins.Meanwhile，the expression of HINT1 in RPE cells is down-regulated after treatment of H2O2，indicating HINT1 may play an important role in the pathogenesis of age-related macular degeneration （AMD） by regulating apoptosis.This research provides potential target for AMD therapy and drug development.

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备注/Memo:
国家自然科学基金资助（编号：81202198、81473059、81602698）；陕西省科技新星计划项目（编号：2015LJXX-07）；中国博士后科学基金特别资助（编号：2015T81036）；西安交通大学青年跟踪项目（编号：qngz2016004）；中国博士后科学基金一等资助（编号：2014M560790）；陕西省自然科学基金资助（编号：2017JM8041）
更新日期/Last Update: 2019-01-04