[1]汪伟,李翔,刘红佶,等.补肾活血中药血清对加压纯化培养视网膜神经节细胞PI3K/AKT信号转导通路的影响[J].眼科新进展,2017,37(9):805-809.[doi:10.13389/j.cnki.rao.2017.0204]
　WANG Wei,LI Xiang,LIU Hong-Ji,et al.Effects of Chinese medicine bushenhuoxue on PI3K/Akt signal transduction pathway of pressurized and cultured retinal ganglion cells in vitro[J].Recent Advances in Ophthalmology,2017,37(9):805-809.[doi:10.13389/j.cnki.rao.2017.0204]
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补肾活血中药血清对加压纯化培养视网膜神经节细胞PI3K/AKT信号转导通路的影响/HTML
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《眼科新进展》[ISSN:1003-5141/CN:41-1105/R]

卷:
37卷
期数:
2017年9期
页码:
805-809
栏目:
实验研究
出版日期:
2017-09-05

文章信息/Info

Title:
Effects of Chinese medicine bushenhuoxue on PI3K/Akt signal transduction pathway of pressurized and cultured retinal ganglion cells in vitro
作者:
汪伟; 李翔; 刘红佶; 牟琳; 张丹
646000　四川省泸州市，西南医科大学附属中医医院（汪伟，牟琳，张丹）；610072　四川省成都市，成都中医药大学附属医院（汪伟，李翔，刘红佶）
Author(s):
WANG Wei; LI Xiang; LIU Hong-Ji; MOU Lin; ZHANG Dan
Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Southwest Medical University（WANG Wei，MOU Lin，ZHANG Dan），Luzhou 646000，Sichuan Province，China；Hospital Affiliated to Chengdu University of TCM（WANG Wei，LI Xiang，LIU Hong-Ji），Chengdu 610072，Sichuan Province，China
关键词:
视网膜神经节细胞; 中药/补肾活血; PI3K; Akt; 加压纯化培养; 信号转导通路
Keywords:
retinal ganglion cells; traditional Chinese medicine/bushenhuoxue; PI3K; Akt; pressurized and purified culture; signal transduction pathway
分类号:
R774
DOI:
10.13389/j.cnki.rao.2017.0204
文献标志码:
A
摘要:
目的　研究补肾活血中药血清对加压纯化培养视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）凋亡模型PI3K/Akt信号转导通路主要成员PI3K及Akt表达的影响，探索补肾活血法保护RGCs的机制。方法制备补肾活血中药含药血清，体外纯化SD大鼠RGCs，采取开放式压力控制培养系统建立体外加压培养RGCs凋亡模型，以50 g·L-1、100 g·L-1、200 g·L-1血清浓度梯度补肾活血中药血清分别处理。将RGCs分为5组，分别为正常培养组（N组）、对照组（C组）、50 g·L-1补肾活血中药血清组（50 g·L-1BSHX组）、100 g·L-1补肾活血中药血清组（100 g·L-1BSHX组）、200 g·L-1补肾活血中药血清组（200 g·L-1BSHX组），Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测补肾活血中药血清对RGCs PI3K及Akt mRNA表达水平的影响，Western blot检测各组PI3K、Akt蛋白表达量。结果　Q-PCR检测各组mRNA结果：C组（0.04±0.01）与N组（1.00±0.04）相比，RGCs中PI3K、Akt的mRNA表达水平下降，差异均有统计学意义（均为P＜0.05），而50 g·L-1、100 g·L-1、200 g·L-1BSHX组（0.18±0.01、0.21±0.02，0.22±0.01、0.36±0.01，0.84±0.10、1.07±0.17）与C组相比，PI3K、Akt mRNA含量逐渐升高，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。Western blot检测各组蛋白表达，C组与N组相比，细胞PI3K、Akt的蛋白表达水平下降，差异有统计学意义（P＜0.05），而50 g·L-1、100 g·L-1、200 g·L-1BSHX组与C组相比，PI3K、Akt蛋白表达量逐渐升高，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　补肾活血中药血清抑制加压诱导的RGCs凋亡，其机制可能与激活PI3K/Akt信号转导通路有关。
Abstract:
Objective　To investigate the influence of bushenhuoxue drug-containing serum on PI3K and Akt signaling pathway in purified retinal ganglion cell （RGCs） in vitro of Sprague-Dawley （SD） rats，and to explore the protective mechanisms of bushenhuoxue recipe on RGCs.Methods　At first，bushenhuoxue drug-containing serum was prepared，and the RGCs of SD rats were purified；after the apoptotic model of pressurized and purified RGCs was established successfully in vitro using open pressure control system，RGCs were dealt with 50 g·L-1，100 g·L-1，200 g·L-1 concentration gradient of bushenhuoxue drug-containing serum.Then the subjected cells were divided into normal culture group （N group），control group （C group），50 g·L-1 bushenhuoxue group （50 g·L-1 BSHX group），100 g·L-1 bushenhuoxue group （100 g·L-1 BSHX group），200 g·L-1 bushenhuoxue group （200 g·L-1 BSHX group）.Finally，cell apoptotic rate was detected by Annexin V-FITC/PI staining，while real-time quantitative PCR （qRT-PCR） and Western blot were used to detect the mRNA and protein expression of PI3K and Akt in each group respectively.Results　The results of qRT-PCR detection showed that PI3K，Akt mRNA expression level in C group （0.04±0.01） was decreased compared with N group（1.00±0.04），and the difference was statistically significant （all P<0.05），while PI3K，Akt mRNA levels in 50 g·L-1，100 g·L-1 and 200 g·L-1 BXHX group （0.18±0.01，0.21±0.02，0.22±0.01，0.36±0.01，0.84±0.10，1.07±0.17） were increased compared with the C group，and the difference was statistically significant （all P<0.05）.The Western blot results of each group showed that PI3K，Akt protein expression level in C group was decreased compared with N group，with statistical difference （all P<0.05），while PI3K，Akt protein expression levels in 50 g·L-1，100 g·L-1 and 200 g·L-1 BSHX group were increased compared with C group，with statistical difference （all P<0.05）.Conclusion　Bushenhuoxue drug-containing serum may inhibit the RGCs apoptosis induced by pressure，which may be related to the activation of PI3K/Akt signal transduction pathway.

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备注/Memo

备注/Memo:
国家自然科学基金资助（编号：81373695）
更新日期/Last Update: 2017-10-12